Poly(A) 聚合酶將 ATP（由 AMP 催化）附著到 RNA 的 3? 羥基上，這對(duì)于制備帶有 Poly(A) 尾的 RNA 非常有用。

該酶以 25 mM Tris-HCl、500 mM NaCl、1 mM MgCl ₂、0.1 mM DTT、0.1 mM EDTA 和 50% 甘油的形式提供；25°C 時(shí) pH 8.0。

10 倍濃度的 Poly(A) 聚合酶反應(yīng)緩沖液包含 500 mM Tris-HCl、2.5 M NaCl 和 100 mM MgCl ₂，25°C 時(shí) pH 為 7.9。

Poly(A) 聚合酶催化 ATP 中的 AMP 添加到 RNA 的 3? 羥基上。該反應(yīng)需要 Mg ²⁺并且與模板無(wú)關(guān)。

• 存儲(chǔ)溫度：–25°C 至 –15°C

• 分子量：53,870 道爾頓

?該蛋白質(zhì)由表達(dá)質(zhì)粒 Poly(A) 聚合酶基因的 大腸桿菌菌株產(chǎn)生。

1 個(gè)單位定義為在 37°C 下 10 分鐘內(nèi)將 1 nmol ATP 結(jié)合到酸不溶性物質(zhì)中的酶量。

使用說明

1. 按所列順序配制總體積為 20 µL 的以下反應(yīng)混合物：

• 15 µL 無(wú)核酸酶水中的 1-10 µg 純化 RNA

• 2 µL 10x Poly(A) 聚合酶反應(yīng)緩沖液 (B7460)

• 2 µL 10mM ATP (N2070-10)

• 1 µL Poly(A) 聚合酶 (P7460L)

2. 將反應(yīng)混合物在 37°C 下孵育 30 分鐘。

3. 通過添加 EDTA（終濃度 10mM）終止反應(yīng)或繼續(xù)進(jìn)行凈化步驟。?

質(zhì)量控制

使用兩倍系列稀釋法測(cè)量比活性。_{在 1x 反應(yīng)緩沖液（50 mM Tris-HCl、250 mM NaCl、10 mM MgCl 2}、pH 7.9、25°C 下）中稀釋酶，并添加到含有 15-mer RNA 寡核苷酸、1x 反應(yīng)緩沖液的 50 µL 反應(yīng)液中、1 mM ATP、2.5 mM MnCl ₂和 3H-ATP。反應(yīng)在 37°C 下孵育 10 分鐘，置于冰上，并使用 Sambrook 和 Russell 的方法進(jìn)行分析（分子克隆，v3，2001，第 A8 頁(yè)）。 25-A8.26）。

_{蛋白質(zhì)濃度由 OD 280}吸光度確定。

通過濃縮和稀釋酶溶液的 SDS-PAGE，然后進(jìn)行銀染檢測(cè)來評(píng)估物理純度。通過將濃縮樣品中污染物條帶的總質(zhì)量與稀釋樣品中目標(biāo)蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的條帶質(zhì)量進(jìn)行比較來評(píng)估純度。

單鏈核酸外切酶在 50 µL 反應(yīng)液中測(cè)定，其中含有放射性標(biāo)記的單鏈 DNA 底物和 10 µL 酶溶液，并在 37°C 下孵育 4 小時(shí)。

雙鏈核酸外切酶活性在 50 µL 反應(yīng)液中測(cè)定，其中含有放射性標(biāo)記的雙鏈 DNA 底物和 10 µL 酶溶液，并在 37°C 下孵育 4 小時(shí)。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性在含有 0.5 µg 質(zhì)粒 DNA 和 10 µL 酶溶液的 50 µL 反應(yīng)液中測(cè)定，并在 37°C 下孵育 4 小時(shí)。

使用 5 µL 酶溶液重復(fù)樣品評(píng)估大腸桿菌污染，這些樣品已變性，并使用與 16S rRNA 基因座相對(duì)應(yīng)的寡核苷酸引物 ?在 TaqMan qPCR 測(cè)定中篩選污染大腸桿菌基因組 DNA 的存在?。?

使用 RNAse Alert 試劑盒（Integrated DNA Technologies）按照制造商的指南評(píng)估非特異性 RNAse 污染。

該產(chǎn)品可用于分子生物學(xué)應(yīng)用，例如：

• 制備多聚A尾RNA

• 3'端RNA標(biāo)記

• mRNA療法