單克隆抗體藥物是生物制藥的一個重要分支，因其高靶向性和特異性而受到廣泛關注。隨著單克隆抗體技術的不斷發(fā)展，抗體藥物在疾病的預防、診斷和治療中發(fā)揮著舉足輕重的作用。

抗體藥物作為合成蛋白的天然特性，在生產(chǎn)、儲存和體內(nèi)使用過程中容易受到體外和體內(nèi)復雜環(huán)境的物理和化學影響。并發(fā)生多種理化性質(zhì)的變化，導致免疫原性增加、半衰期縮短，甚至失效。

因此，如何提高抗體藥物的穩(wěn)定性、降低免疫原性、延長半衰期、提高其體內(nèi)生物利用度是抗體藥物應用中急需解決的關鍵問題。

1.抗體分子結構及穩(wěn)定性研究意義

抗體是指機體產(chǎn)生的、能與抗原特異性結合的免疫球蛋白。抗體由 B 淋巴細胞轉(zhuǎn)化的漿細胞分泌和產(chǎn)生。每個B淋巴細胞系只能產(chǎn)生一種針對特定抗原決定簇的特異性抗體。這種由單一細胞系產(chǎn)生的抗體稱為單克隆抗體（mAb）。

常規(guī)單克隆抗體分子由兩條重鏈（HC）和兩條輕鏈（LC）通過鏈間二硫鍵連接形成“Y"形結構，可分為三個功能部分：兩個抗原結合片段(Fab) 和晶體區(qū)域 (Fc)。兩個Fab通過鉸鏈區(qū)與Fc連接，構象變化比Fc更加靈活。 Fab 的 Fv 區(qū)由重鏈和輕鏈的一對可變區(qū)（VH 和 VL）組成。通常，F(xiàn)v區(qū)經(jīng)過糖基化修飾，這決定了抗體如何與適應性免疫和體液免疫系統(tǒng)中的其他成分相互作用。

研究發(fā)現(xiàn)，某些單克隆抗體藥物雖然在體外實驗中表現(xiàn)出良好的藥物活性，但進入臨床試驗階段時會遇到體內(nèi)活性降低的問題。因此，在藥物研發(fā)初期必須考慮藥效學問題。

目前提高蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性的方法主要有非共價修飾、化學修飾、添加蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、蛋白質(zhì)工程等。在液態(tài)時，通過礦化技術直接在蛋白質(zhì)表面形成磷酸鈣礦化殼，提高蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。

可見，在保證抗體的親和力和表達量不受到太大影響的同時，大程度地提高其穩(wěn)定性對于抗體藥物的研發(fā)具有重要的現(xiàn)實意義。

2.抗體穩(wěn)定性評估方法

生物技術產(chǎn)品的穩(wěn)定性評估通常包括生物活性分析、分子結構和純度分析（包括降解產(chǎn)物的定量檢測）以及相關參數(shù)（如外觀、pH值等）的監(jiān)測。

結合以上數(shù)據(jù)評價樣品的熱穩(wěn)定性、聚集性和分子間力的大小。

在熱穩(wěn)定性的評價和分析中，差示掃描量熱法（DSC）是目前常用的測量蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性的方法，該方法不僅可以獲得熔化溫度，還可以獲得與熔化相關的焓、熵和自由能。

此外，在蛋白質(zhì)溶解度預測方面，研究人員相繼提出了交叉作用色譜（CIC）、親和捕獲自相互作用-納米粒子光譜（AC-SINS）或克隆自相互作用-生物層干擾（CSI）-BLI）等技術也取得了一定的進展。

這些方法評估低蛋白質(zhì)濃度下單克隆抗體交叉或自身相互作用的可能性，以預測高濃度下單克隆抗體的特性。

隨著計算機輔助設計在生物大分子開發(fā)中的應用，對于晶體結構不確定的分子，可以利用大量的建模和仿真軟件來預測抗體-抗原復合物的三維結構。不同的力場也可用于分子動力學 (MD) 模擬 3，以獲得有關結合相互作用、穩(wěn)定性的更詳細信息，并更輕松地計算非共價鍵能（疏水、靜電、非極性和結合能） 。

3.穩(wěn)定性修改方案

3.1 抗體分子結構的修飾

基于抗體分子化學修飾位點的結構修飾一直是穩(wěn)定性優(yōu)化的重要方向。其中，抗體CDR區(qū)的脫酰胺基可能會導致抗原結合功能的喪失。

研究已逐漸闡明脫酰胺和化學修飾的機理及其作用。而且研究證實Gln的脫酰胺速率比Asn慢很多。因此，去除脫酰胺位點或通過將Asn突變?yōu)镚ln來降低脫酰胺作用的概率被視為解決方案4。

3.2 生產(chǎn)工藝優(yōu)化

研究指出，抗體在過酸或過堿條件下會以不同方式降解。在用于靜脈注射的pH 6.8的免疫球蛋白（IGIV）制劑中，可以通過添加麥芽糖穩(wěn)定劑來改善這種由pH引起的不穩(wěn)定性。

表面活性劑通常添加到單克隆抗體藥物制劑中，以減少疏水區(qū)域的暴露，或通過競爭吸附位點來減少蛋白質(zhì)相互作用和界面誘導的聚集。其中，常用的非離子表面活性劑有聚山梨酯20和聚山梨酯80 7。

此外，某些氨基酸經(jīng)常被用作賦形劑以防止聚集。常用的精氨酸（Arg）可以增加蛋白質(zhì)的溶解度并保護它們免受光和高溫引起的聚集。

改進抗體藥品的儲存或包裝通常更經(jīng)濟。迄今為止，防止蛋白質(zhì)與容器表面相互作用的方法是對表面進行涂層，即表面鈍化。

涂層大致可分為兩類：單層涂層（較常用）和多層涂層（可控性較差）。更常用的涂層聚合物包括乙二醇或環(huán)氧乙烷11。此外，使用極性或中性電荷的聚合物涂層也能夠減少蛋白質(zhì)吸附12。

4。結論

治療性單克隆抗體藥物是目前生物醫(yī)藥領域的研發(fā)熱點，在此基礎上，單鏈抗體（SCFV）、單域抗體、抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）等藥物應用于多種器官系統(tǒng)疾病相繼獲批上市。

如何在不改變藥物靶向性、平衡效應和免疫原性的情況下提高藥物的穩(wěn)定性是一個至關重要的問題。并盡可能延長藥物半衰期，維持有效血藥濃度?？贵w穩(wěn)定性受環(huán)境、配方、自身結構、生產(chǎn)操作等多種因素影響，有效評價抗體穩(wěn)定性是個體化改造的前提。

穩(wěn)定性評價不應僅根據(jù)降解產(chǎn)物的有無或穩(wěn)定分子的濃度來定義，而應包括以下三個方面：物理穩(wěn)定性研究的評價應涵蓋聚集體和碎片的數(shù)量以及結構；化學穩(wěn)定性研究應關注蛋白質(zhì)降解；生物穩(wěn)定性研究應確保單克隆抗體對靶標的活性與其物理和化學穩(wěn)定性一致。

深入探討影響抗體穩(wěn)定性的因素和評價方法，將有助于抗體藥物的合理優(yōu)化和新藥的研發(fā)。